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哪些因素会影响ELISA试剂盒的试验?

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  ELISA试剂盒,即酶联免疫法。ELISA法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,并具有操作简洁、无放射性危害的优点,因此多年来广泛应用于各高校、医院、血站和科研机构的试验室中。
 
  影响ELISA试验的要素有如下三方面:
 
  一、试剂盒
 
  1、抗原、抗体活性对效价的影响:主要是试剂中抗体(或抗原)的效价下降或失活,成果不易判别。再有ELISA试剂盒灵敏度高,对杂质的反响灵敏度也高,试验中空白对照OD值偏高或假阳性;
 
  2、酶结合物浓度过高,也会导致OD值假性增高。
 
  二、试验仪器
 
  1、加样器是否通过校正,酶免测定血清用血量很少,如手工加样器的功能不好,吸取样品不,会使成果忽高忽低;
 
  2、每次洗板前,应查看洗板机针孔有无阻塞。
 
  三、ELISA试剂盒操作
 
  1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后运用,试剂用完及时放回冰箱冷藏,避免形成试验成果假性下降;
 
  2、加样时留意勿触及包被板底部,避免擦伤包被物使抗体(抗原)掉落而影响试验成果的准确性;
 
  3、洗刷不充分,会使成果假性增高,过分洗刷呈假阴性;
 
  4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽,特别是冬天板从37℃水浴箱取出时,底部留有水汽,应将板底擦干后进行比色,水汽或孔内气泡也会使OD值升高;
 
  5、抗原与抗体反响达到完全平衡,依赖于温度与时刻。温度高于45℃易引起失活及符号物掉落,温度低于4℃,影响反响速度。
 
  总归,由于ELISA试剂盒试验的影响要素较多,在实践工作中必须操作规范、仔细,避免和排除各种要素的影响,使之得到准确可靠的查验成果。
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