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转基因生物观测镜的核心部件解析:激发光源与滤光镜系统

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  转基因生物观测镜作为荧光检测领域的核心设备,其性能优劣主要取决于激发光源和滤光镜系统两大关键部件。这两个系统的协同工作,决定了观测镜的检测灵敏度、信噪比和成像质量。
 
  激发光源是观测镜的能量来源,负责提供特定波长的激发光。目前主流的光源类型包括汞灯、氙灯和LED光源。汞灯具有高亮度和丰富的谱线,但寿命较短且发热量大;氙灯光谱连续稳定,但价格昂贵;LED光源则以其长寿命、低功耗和快速开关特性成为发展趋势。光源的选择需根据检测需求确定,对于GFP(绿色荧光蛋白)检测,通常选择470-490nm的蓝光激发;对于DsRed等红色荧光蛋白,则需要540-560nm的绿光激发。光源的稳定性直接影响检测结果的重复性,因此需要配备稳压电源和散热系统,确保光强输出恒定。
 
  滤光镜系统是观测镜的"眼睛",由激发滤光片、二向色镜和发射滤光片组成。激发滤光片位于光源和样品之间,用于筛选出特定波长的激发光,滤除杂散光。二向色镜呈45°角放置,能够反射激发光而透过发射荧光,实现光路分离。发射滤光片位于检测器前,用于收集样品发出的荧光信号,同时阻挡激发光的反射光。三片滤光镜的匹配度至关重要,需要根据荧光蛋白的激发和发射光谱特性精确选择。例如GFP检测通常采用470/40nm激发滤光片、495nm二向色镜和525/50nm发射滤光片组合。滤光镜的光学质量直接影响透光率和截止深度,优质滤光镜的截止深度可达OD6以上,能够有效抑制背景噪声。

 


 
  激发光源与滤光镜系统的协同工作流程如下:光源发出的白光经过激发滤光片后,形成单色激发光;激发光经二向色镜反射后照射到样品上,激发荧光蛋白发出荧光;荧光和部分反射的激发光一起返回,通过二向色镜时,荧光透过而激发光被反射;透过的荧光再经发射滤光片进一步纯化,最终被CCD或CMOS检测器捕获。整个过程中,滤光镜系统的性能决定了信噪比的高低,而光源的稳定性则影响检测的重复性。现代转基因生物观测镜还配备了自动滤光轮系统,可快速切换不同滤光片组合,实现多色荧光同时检测,大大提高了检测效率。
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