维多珠ELISA试剂盒标准化操作流程全解析-北京群晓科苑生物技术有限公司

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维多珠ELISA试剂盒标准化操作流程全解析

更新时间：2025-12-19

　　在免疫检测领域，维多珠ELISA试剂盒凭借高特异性、强抗干扰性和微量样本适配性，成为科研与临床检测的“利器”。但实验结果的高度可重复性，离不开标准化的操作流程(SOP)。本文梳理关键步骤与注意事项，助您高效完成检测。

　　一、实验前准备：细节决定成败

　　首先核对试剂盒组分(酶标板、标准品、抗体预混液、显色剂等)是否齐全，检查有效期及储存条件(通常2-8℃避光保存)。根据样本量选择合适规格酶标板(如96孔板)，提前30分钟取出平衡至室温(25℃左右)。样本需按说明书要求预处理：血清/血浆需离心去除沉淀，细胞上清需过滤除菌，避免反复冻融(建议分装保存于-80℃)。

　　二、加样与孵育：精准控制是关键

　　1.标准曲线制备：用稀释液将标准品梯度稀释(通常设6-8个浓度点)，每孔加入100μL，注意“从低到高”顺序避免交叉污染；空白孔仅加稀释液。

　　2.样本加样：待测样本按预估浓度稀释后，每孔加入100μL(建议做复孔，减少误差)；若样本浓度过高，需进一步稀释至标准曲线线性范围内。

　　3.封闭与孵育：每孔加入200μL封闭液(如5%脱脂奶粉)，37℃孵育60分钟(或室温1小时)，阻断非特异性结合位点。

　　三、检测反应：时间与温度严把控

　　弃去孔内液体，洗板3次(每次300μL洗涤液，浸泡30秒)，拍干。加入生物素标记的维多珠抗体预混液100μL/孔，37℃孵育30分钟；重复洗板后，加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素100μL/孔，37℃孵育20分钟。较后洗板5次确保无残留，加入显色底物(如TMB)100μL/孔，避光反应15-20分钟(密切观察颜色变化，避免过显色)。

　　四、终止与读数：规范操作保准确

　　加入终止液(如2M H₂SO₄)50μL/孔终止反应，立即用酶标仪测定450nm波长处的吸光度(OD值)。以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标拟合标准曲线，计算样本浓度时需乘以稀释倍数。

　　注意事项：全程避免气泡产生(影响吸光度)；不同批次试剂盒勿混用；实验需在洁净台内操作，防止微生物污染。遵循此SOP，可显著提升维多珠ELISA试剂盒的检测稳定性与数据可靠性，为后续分析提供坚实基础。