弹性蛋白(Elastin)是细胞外基质的重要组成成分，其降解水平与肺气肿、动脉粥样硬化、皮肤老化等多种病理生理过程密切相关。目前，ELISA法因其高灵敏度和可重复性，成为定量检测样本中弹性蛋白或其降解片段(如ELM、desmosine)的主流方法。以下以常见的
弹性蛋白检测试剂盒为例，详解标准操作流程。
一、实验前准备
样本类型确认：常见样本包括血清、血浆(EDTA或肝素抗凝)、细胞培养上清或组织匀浆液。避免反复冻融，建议分装后–80℃保存。
试剂回温：将试剂盒从冰箱取出，室温(20–25℃)平衡30分钟，防止冷凝水影响反应。
标准品复溶：按说明书用标准品稀释液精确复溶冻干标准品，再进行梯度稀释(通常为2倍或3倍系列)，制作标准曲线(如0、15.6、31.25…1000 ng/mL)。
二、加样与孵育
加样：向预包被抗体的96孔板中加入50–100μL标准品、空白对照及待测样本(必要时预稀释)。每组设复孔以减少误差。
第一次孵育：37℃孵育60–90分钟，使弹性蛋白抗原与捕获抗体结合。
洗板：弃去液体，用1×洗液洗涤3–5次，每次30秒，拍干残留液体(避免交叉污染)。
三、检测抗体与显色
加酶标抗体：加入100μL生物素化或HRP标记的检测抗体，37℃孵育30–60分钟。
再次洗板：彻底清洗未结合抗体。
加显色底物：加入TMB等显色液，避光室温反应10–15分钟(时间依信号强度调整)。
终止反应：加入50μL 2M H₂SO₄终止液，溶液由蓝变黄。
四、读数与数据分析
使用酶标仪在450 nm波长(参考波长630 nm)测定吸光度(OD值)。以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制拟合曲线(通常为四参数逻辑曲线)，计算样本中弹性蛋白浓度，并乘以稀释倍数。
注意事项：
避免样本溶血或脂血，可能干扰检测；
不同批次试剂盒不可混用；
若样本浓度过高，需进一步稀释至标准曲线线性范围内。
规范操作是获得可靠数据的前提。掌握上述流程，可显著提升弹性蛋白检测的准确性与可重复性。
